Практикум по микробиологии
Т34 Теппер Е. 3. и др.
Практикум по микробиологии/Е. 3. Теппер, В. К. Шильникова,
Г. И. Переверзева. - 4-е изд., перераб. и доп.
- М.: Колос, 1993. - 175 с.: ил. - (Учебники и учеб. пособия для высш. учеб. заведений). ISBN 5-10-002834-3, ББК 40.5, УДК 579.64(075.8) (Теппер Екатерина Зельмановна, Шильникова Викторина Кузьминична, Переверзева Генриетта Ивановна)
Показаны приемы исследования микроорганизмов. Приведены методы
изготовления и стерилизации питательных сред, количественного и качественного
учета бактерий и грибов на различных субстратах. Описаны работы, посвященные микробиологическому анализу почвы, бактериальных препаратов и кормов.
|
|
ОГЛАВЛЕНИЕ | |
Раздел первый. ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ | |
Глава 1. Микроскоп и техника микроскопирования | |
1.1. Устройство микроскопа | |
1.1.1. Механическая часть микроскопа | 3 |
1.1.2. Оптическая часть микроскопа | 4 |
1.2. Основные технические характеристики микроскопа | |
1.2.1. Увеличительная способность микроскопа | 9 |
1.2.2. Разрешающая способность микроскопа | 9 |
1.3. Работа с микроскопом | |
1.3.1. Общие правила работы с микроскопом | 10 |
1.3.2. Работа с иммерсионной системой микроскопа | 10 |
1.3.3. Установка освещения | 11 |
1.3.4. Измерение объектов | 11 |
Глава 2. Культивирование, посев, хранение и приготовление препаратов микроорганизмов | |
2.1. Общие представления | |
2.1.1. Основные термины | 12 |
2.1.2. Техника посева | 14 |
2.1.3. Хранение микроорганизмов | 15 |
2.2. Методы приготовления препаратов микроорганизмов | |
2.2.1. Техника взятия культуры для приготовления препарата | 15 |
2.2.2. Исследование живых клеток микроорганизмов методами 'раздавленной' и 'висячей' капли | 15 |
2.2.3. Фиксированные препараты микроорганизмов | 16 |
Глава 3. Исследование морфологии микроорганизмов | |
3.1. Форма клеток | |
3.1.1. Бактерии | 18 |
3.1.2. Актиномицеты | 21 |
3.1.3. Нокардиа | 23 |
3.1.4. Микобактерии | 23 |
3.1.5. Грибы | 23 |
3.2. Строение (цитохимические методы исследования) | 28 |
3.2.1. Окраска клеток микроорганизмов по Граму | 29 |
3.2.2. Выявление кислотоустойчивости у бактерий методом Циля-Нильсена | 30 |
3.2.3. Окраска спор у бактерий | 31 |
3.2.4. Окраска капсул | 32 |
3.2.5. Окраска жгутиков | 33 |
3.2.6. Окраска ядерного вещества бактерий | 34 |
3.2.7. Окраска включений клеток микроорганизмов | 35 |
Глава 4. Питание микроорганизмов | |
4.1. Значение отдельных питательных элементов | 37 |
4.2. Приготовление питательных сред | |
4.2.1. Общие сведения | 40 |
4.2.2. Мясо-пептонный бульон (МПБ) | 41 |
4.2.3. Мясо-пептонный агар (МПА) | 42 |
4.2.4. Мясо-пептонная желатина (МПЖ) | 42 |
4.2.5. Картофельный агар | 43 |
4.2.6. Пивное сусло | 43 |
4.2.7. Сусло-агар | 43 |
4.2.8. Обезжиренное молоко | 43 |
4.2.9. Дрожжевые среды | 44 |
4.2.10. Бобовый отвар | 44 |
4.3. Методы стерилизации | |
4.3.1. Прокаливание, или фламбирование | 44 |
4.3.2. Стерилизация сухим жаром | 44 |
4.3.3. Стерилизация текучим паром | 46 |
4.3.4. Стерилизация насыщенным паром под давлением | 46 |
4.3.5. Пастеризация | 47 |
4.3.6. Стерилизация фильтрованием через мелкопористые фильтры | 47 |
Глава 5. Учет численности и выделение чистой культуры микроорганизмов | |
5.1. Методы учета численности | |
5.1.1. Учет численности бактерий в почве методом питательных пластин (метод Коха) | 48 |
5.1.2. Учет численности микроорганизмов в воде и других жидкостях | 50 |
5.1.3. Учет численности бактерий в воздухе | 51 |
5.2. Выделение чистой культуры бактерий | 52 |
Глава 6. Идентификация микроорганизмов | |
6.1. Морфологические и культуральные признаки микроорганизмов | |
6.1.1. Морфологические признаки | 53 |
6.1.2. Культуральные признаки | 54 |
6.1.3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным и морфологическим признакам | 56 |
6.2. Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов | |
6.2.1. Общие сведения | 61 |
6.2.2. Отношение к источникам углерода и азота | 62 |
6.2.3. Изучение продуктов жизнедеятельности | 62 |
6.2.4. Отношение к кислотам и щелочам | 63 |
6.2.5. Отношение к кислороду | 63 |
6.2.6. Устойчивость к факторам внешней среды | 63 |
6.2.7. Отношение к антибиотикам и лизоциму | 63 |
Глава 7. Превращение микроорганизмами безазотистых органических веществ | |
7.1. Брожение | |
7.1.1. Общие сведения | 64 |
7.1.2. Спиртовое брожение | 65 |
7.1.3. Молочнокислое брожение | 68 |
7.1.4. Маслянокислое брожение | 73 |
7.1.5. Брожение пектиновых веществ | 75 |
7.1.6. Брожение целлюлозы | 76 |
7.2. Окисление | |
7.2.1. Окисление целлюлозы | 78 |
7.2.2. Окисление жира | 81 |
Глава 8. Превращение микроорганизмами органических и минеральных соединений азота | |
8.1. Аммонификация | |
8.1.1. Аммонификация белковых веществ | 83 |
8.1.2. Аммонификация мочевины | 85 |
8.2. Нитрификация и денитрификация | |
8.2.1. Выявление бактерий различных фаз нитрификации | 86 |
8.2.2. Жидкие культуры нитрифицирующих бактерий | 89 |
8.2.3. Денитрификация (нитратное дыхание) | 90 |
8.3. Азотфиксация | |
8.3.1. Знакомство с клубеньковыми бактериями | 91 |
8.3.2. Свободноживущие азотфиксирующие бактерии | 93 |
8.3.3. Знакомство с новыми формами азотфиксирующих бактерий | 96 |
Раздел.второй. СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ | |
Глава 9. Общий микробиологический анализ почвы | |
9.1. Подготовка микробиологического материала для анализа | |
9.1.1. Взятие средней почвенной пробы и подготовка образца | 99 |
9.1.2. Приготовление почвенной суспензии и посев | 99 |
9.2. Состав и приготовление питательных сред для разных групп микроорганизмов | |
9.2.1. Группы микроорганизмов, выявляемые на плотных средах | 101 |
9.2.2. Группы микроорганизмов, выявляемых на жидких средах (метод предельных разведений) | 102 |
9.2.3. Группы микроорганизмов, выявляемых методом обрастания комочков почвы | 103 |
9.3. Определение численности различных групп микроорганизмов | |
9.3.1. Учет на плотных средах | 104 |
9.3.2. Учет на жидких средах | 107 |
9.3.3. Учет методом обрастания комочков почвы | 111 |
9.3.4. Определение общей численности микроорганизмов в почве прямым подсчетом под микроскопом | 112 |
Глава 10. Изучение микробных ценозов почвы и микроорганизмов ризосферы | |
10.1. Общий состав и соотношение почвенных микроорганизмов | |
10.1.1. Метод обрастания стекол по Холодному | 115 |
10.2. Микроорганизмы, разлагающие гумусовые вещества | |
10.2.1. Метод Виноградского | 116 |
10.2.2. Метод Виноградского в модификации Теппер | 116 |
10.3. Микробные ценозы, участвующие в разложении различных органических и неорганических остатков в почве | |
10.3.1. Разложение микроорганизмами свежих органических остатков с образованием гумуса | 117 |
10.3.2. Изучение микробных ценозов, участвующих в разложении гербицидов - производных сим-триазинов в почве | 119 |
10.3.3. Микробные пейзажи при нитрификации, разложении гумусовых кислот и деструкции симазина и атразина (метод Теппер) | 119 |
10.4. Микроорганизмы, обитающие в прикорневой зоне и на корнях растений | |
10.4.1. Общие сведения | 121 |
10.4.2. Учет бактерий в ризосфере методом Красильникова | 121 |
10.4.3. Учет ризосферной и корневой микрофлоры методом последовательных отмываний корней (по Теппер) | 122 |
Глава 11. Биологическая активность почвы | |
11.1. Общая биологическая активность почвы | |
11.1.1. Определение общей биологической активности почвы по методу Мишустина, Вострова, Петровой (по интенсивности разложения полотна) | 123 |
11.1.2. Метод определения общей микробиологической активности почвы по выделению диоксида углерода | 123 |
11.2. Аммонифицирующая активность почвы и микроорганизмов | |
11.2.1. Определение аммонифицирующей активности почвы | 124 |
11.2.2. Определение аммонифицирующей активности микроорганизмов | 125 |
11.3. Нитрифицирующая и денитрифицирующая активность почвы | |
11.3.1. Определение нитрифицирующей активности почвы | 126 |
11.3.2. Определение денитрифицирующей активности почвы | 126 |
11.4. Азотфиксирующая активность микроорганизмов | |
11.4.1. Определение азотфиксирующей активности ацетиленовым методом | 127 |
11.4.2. Определение актуальной (полевой) и потенциальной активности азотфиксации в почве методом Умарова | 128 |
11.4.3. Определение нитрогеназной активности симбиотических азот-фиксирующих бактерий | 130 |
11.4.4. Работа на газовом хроматографе | 131 |
11.5. Выделение и изучение чистых культур клубеньковых бактерий | |
11.5.1. Выделение чистой культуры клубеньковых бактерий | 133 |
11.5.2. Определение специфичности клубеньковых бактерий. Отбор активных (или эффективных) культур клубеньковых бактерий | 135 |
11.5.3. Определение общего и активного симбиотического потенциалов (ОСП, АСП) и удельной активности симбиоза (УАС) по методу Посыпанова | 138 |
11.5.4. Определение вирулентности и конкурентоспособности клубеньковых бактерий | 139 |
Глава 12. Анализ бактериальных препаратов | |
12.1. Жизнеспособность клеток клубеньковых бактерий | |
12.1.1. Экспресс-метод определения жизнеспособности клеток клубеньковых бактерий в сухом нитрагине по Шильниковой, Сигуте | 141 |
12.1.2. Экспресс-метод определения числа жизнеспособных клеток клубеньковых бактерий в ризоторфине на мембранных фильтрах по Шильниковой, Сигуте | 143 |
12.2. Определение числа клеток азотобактера в азотобактерине | 145 |
Глава 13. Микробиология кормов | |
13.1. Эпифитные микроорганизмы зерна | |
13.1.1. Общие сведения | 145 |
13.1.2. Количественный учет микроорганизмов на зерне | 146 |
13.1.3. Определение качественного состава микрофлоры зерна | 147 |
13.2. Микробиологический анализ силоса | |
13.2.1. Общие сведения | 147 |
13.2.2. Качественный состав микрофлоры силоса | 149 |
13.2.3. Количественный учет микроорганизмов в силосе | 149 |
13.2.4. Определение кислотности силоса | 151 |
Глава 14. Микробиология продуктов животноводства | |
14.1. Бактериологический анализ молока | |
14.1.1. Общие сведения | 153 |
14.1.2. Проба на редуктазу | 154 |
14.1.3. Определение общего количества бактерий в молоке | 155 |
14.1.4. Определение титра кишечной палочки (коли-титр) | 156 |
14.1.5. Определение в молоке количества спор лактатсбраживающих анаэробных бактерий | 156 |
14.2. Методы выделения чистых культур молочнокислых бактерий | |
14.2.1. Выделение чистой культуры ацидофильной палочки | 159 |
14.2.2. Выделение чистой культуры молочнокислого стрептококка | 160 |
14.3. Микробиологический анализ других продуктов | |
14.3.1. Микробиологический анализ сыра | 161 |
14.3.2. Микробиологический анализ сливочного масла | 162 |
14.3.3. Микробиологический анализ мяса | 163 |
14.4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам | 165 |
14.5. Микробиологический контроль воды | |
14.5.1. Общие сведения | 166 |
14.5.2. Определение микробного числа | 167 |
14.5.3. Определение коли-титра и коли-индекса | 167 |
Литература | 170 |